Tissue Preparation

Toda imagem histológica é o produto de uma cadeia de agressões controladas ao tecido. A fixação (formaldeído, que faz ligações cruzadas entre proteínas; glutaraldeído e tetróxido de ósmio para microscopia eletrônica) interrompe a autólise por enzimas hidrolíticas e enrijece a peça. A desidratação em série alcoólica crescente retira a água, a diafanização pelo xilol torna o tecido miscível com a parafina, e a inclusão produz o bloco. A microtomia corta fatias de 5 a 20 µm no micrótomo rotativo; para eletrônica, o ultramicrótomo produz 30 a 60 nm em resina epóxi. O corte é distendido em banho-maria, pescado na lâmina, desparafinado, reidratado, corado, desidratado de novo e montado sob lamínula com meio de índice de refração adequado. Cada etapa deixa marca: o lipídio dissolvido pelo xilol vira vacúolo vazio, a retração cria fendas artefatuais em torno das células, e a faca cega produz estrias paralelas (chatter).